Test inhibice patogenu

Účel:

Prokázat, zda Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 inhibuje růst Listeria monocytogenes v mrkvové šťávě.

Zkušební materiály:

1. Lyofilizovaná bakterie Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (živé bakterie v práškové formě – 1 x 109 / rok, dodává K. Petkov) 2. Mrkvová šťáva (bulharskou produkci poskytla 6. 5. 2014 K. Petkov) 3. Plakety s Trypsinový sójový agar s 5 % ovčí krve 4. Listeria monocytogenes – ATCC BAA – 751 5. Listeria monocytogenes – BWH 432

Bakteriální inokulum

Listeria monocytogenes ATC BAA – 751 Na tyto experimenty byly použity předem připravené zmrazené buněčné kultury Listeria monocytogenes BAA – 751. Bakteriální koncentrace byla 9,9 x 108 / ml. Pro kontrolní a testovací vzorky Listeria monocytogenes BAA – 751: Zmrazená zkumavka obsahující Listeria monocytogenes BAA – 751 byla vybrána z mrazáku a ponechána rozmrazit při pokojové teplotě. Bakterie se rozmělněny (1: 10 000) ve sterilním fosfátem pufrovaném solném roztoku, aby se dosáhlo koncentrace přibližně 9,9 x 104 / ml. 5 ml zředěného materiálu se přidalo k 5 ml každé z testovaných vzorků, aby bylo dosaženo koncentrace přibližně 1 x 102 / ml.

Listeria monocytogenes – BWH 432 Na tyto experimenty byly použity předem připravené zmrazené buněčné kultury Listeria monocytogenes – BWH 432. Bakteriální koncentrace je 1,68 x 109 / ml. Pro kontrolní a testovací vzorky Listeria monocytogenes – BWH 432: Zmrazená zkumavka obsahující Listeria monocytogenes – BWH 432 byla vybrána z mrazáku a ponechána rozmrazit při pokojové teplotě. Bakterie byly rozmělněny (1: 100 000) ve sterilním fosfátem pufrovaném solném roztoku, aby se dosáhlo koncentrace přibližně 1,68 x 104 / ml. 30 ul zředěného materiálu se přidalo k 5 ml každé z testovaných vzorků, aby bylo dosaženo koncentrace přibližně 1 x 102 / ml.

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44

1 gram Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 se přidal do 9 ml. Sterilní voda při pokojové teplotě. Roztok se míchal 5 minut, aby se zajistila homogenita směsi. 0,05 ml nebo 0,5 ml připraveného roztoku se přidalo k 5 ml vzorku.

Zkušební postup:

S pozdravem Andrew Onderdonck

Test inhibice patogenu

Účel:

Prokázat, zda Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 inhibuje růst Escherichia coli v zeleninové šťávě.

Zkušební materiály:

1. Lyofilizovaná bakterie Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (živé bakterie v práškové formě – 1x 109 / g) 2. Zeleninová šťáva (3 láhve džusu „Juice Press Organic Complete Source, každá 17 tekutých uncí“ 3. Destičky se sójovým agarem trypsin 4. Escherichia coli – ATCC 25922

Bakteriální inokulum Escherichia coli:

Pro tyto experimenty byly použity předem připravené, zmrazené buněčné kultury Escherichia coli. Koncentrace bakterií je 1,32 x 109 / ml.

Pro kontrolní a testovací vzorky Escherichia coli:

Zmrazená zkumavka obsahující Escherichia coli se vybrala z mrazáku a nechala se roztát při pokojové teplotě. Bakterie byly rozmělněny (1: 10 000) ve sterilním fosfátem pufrovaném solném roztoku, aby se dosáhlo koncentrace přibližně 1 x 105 / ml. 50 ul zředěného materiálu se přidalo do každé z testovaných vzorků, aby bylo dosaženo koncentrace přibližně 1 x 102 / ml. 2 gramy Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 se přidal k 18 ml sterilní vody při teplotě místnosti. Roztok se míchal 5 minut, aby se zajistila homogenita směsi. Do každé z testovaných vzorků se přidalo 0,5 ml připraveného roztoku.

Zkušební postup:

Následující testovací vzorky byly připraveny pro Escherichia coli.

Kontrolní vzorky: 5 lahví, každá s obsahem 50 ml zeleninové šťávy

Testovací vzorky: 5 lahví, každá s obsahem 50 ml vařené zeleninové šťávy, plus Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus. Escherichia coli se přidala ke kontrolním a zkušebním vzorkům popsaným výše. Všechny vzorky se umístily na 24 hodin do chladničky (4 ° C). Po ochlazení se potvrdila bakteriální koncentrace v každé ze vzorků. Uskutečnilo se deset zředění ve sterilním fosfátem pufrovaném solném roztoku. Násobek 0,1 ml pro každé ředění.

stůl 1

Test inhibice patogenu

Účel:

Prokázat, zda Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 inhibuje růst různých koncentrací (1 x 105 / ml, 1 x 103 / ml) Salmonella tifimurium v ​​mrkvové šťávě.

Testované materiály: 1. Lyofilizovaná bakterie Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (prášek CFU 1 x 109 / g, získaný 6. 5. 2014 K. Petkova) 2. Mrkvová šťáva 3. plaku se sójovým agarem trypsin (TSA) 4. Salmonella tifimurium – klinicky izolovaná

Bakteriální inokulum

Salmonella tifomurium

Pro tyto experimenty byly použity předem připravené, zmrazené buněčné kultury Salmonella tifimurium. Koncentrace bakterií je 5,5 x 108 / ml. Pro kontrolní a testovací vzorky Salmonella tifimurium 1 x 105 / ml: Zmrazená zkumavka obsahující Salmonella tifimurium se vybrala z mrazáku a nechala se roztát při pokojové teplotě. Bakterie se rozmělněny (1:10) ve sterilním fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem, aby se dosáhlo koncentrace přibližně 5,5 x 107 / ml. 9 ul zředěného materiálu se přidalo k 5 ml každé z testovaných vzorků, aby bylo dosaženo koncentrace přibližně 1 x 105 / ml.

Pro kontrolní a testovací vzorky Salmonella tifimurium 1 x 103 / ml:

Zmrazená zkumavka obsahující Salmonella tifimurium se vybrala z mrazáku a nechala se rozmrazit při teplotě místnosti. Bakterie se rozmělněny (1: 1 000) ve sterilním fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem, aby se dosáhlo koncentrace přibližně 5,5 x 105 / ml. 9 ul zředěného materiálu se přidalo k 5 ml každé z testovaných vzorků, aby bylo dosaženo koncentrace přibližně 1 x 102 / ml.

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 1 gram Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 se přidal do 9 ml sterilní vody při teplotě místnosti. Roztok se míchal 5 minut, aby se zajistila homogenita směsi. 0,05 ml nebo 0,5 ml připraveného roztoku se přidalo k 5 ml vzorku.

Zkušební postup:

Následující vzorky se připravily na Salmonella tifimurium v ​​každé koncentraci kontrolních vzorků. 3 zkumavky, každá s obsahem 5 ml mrkvové šťávy. Testovací vzorky: 3 zkumavky, každá s obsahem 5 ml mrkvové šťávy plus 0,05 ml Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 3 zkumavky, každá s obsahem 5 ml mrkvové šťávy plus 0,5 ml Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Salmonella tifimurium se přidala do kontrolních a testovacích vzorků popsaných výše. Všechny vzorky se skladovaly v lednici (4 ° C) po dobu 24 hodin. Po ochlazení se stanovila bakteriální koncentrace pro každou ze vzorků. Byly provedeny 10-násobné ředění ve sterilním fosfátem pufrovaném solném roztoku. 0,1 ml každého ředění se naočkovali na TSA. Agarové plotny se inkubovány 24 hodin při 37 ° C a pak se spočítali; všechna množství byly zaznamenány jako CFU / ml. Všechny manipulované testovací vzorky se pak umístily na 48 hodin při 37 ° C. Po inkubaci se stanovila bakteriální koncentrace, jak je popsáno výše.

Výsledky: tabulka

S pozdravem Andrew Onderdonck

Klinické zkoušky s Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 u pacientů s Helicobacter pylori

Pacienti: Borislav Vladimirov, Yana Valerieva, Ivan Terziev, Kiril Petkov Gastroenterologické oddělení, Univerzitní nemocnice „Queen Joanna – Isula“, Sofia, Patologické oddělení, Univerzitní nemocnice „Queen Joanna – Isula“, Sofia ProViotik AD, Bulharsko

Úvod:

Cílem této studie bylo prokázat účinek Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus GLB-44 u pacientů infikovaných Helicobacter pylori.

Metody:

Sledování zahrnovalo 24 pacientů s průměrným věkem 45,46 ± 13,4 let, z nichž 50% byly ženy. Všichni pacienti jsou pozitivní na Helicobacter pylori. Infekce se detekovány rychlým ureázovým testem (RUT), testem fekálního antigenu, dechovým testem a histologickým vyšetřením nebo kombinací všech výše uvedených. Terapie byla v minulosti neúčinná u šesti pacientů a zbytek se předtím neléčil.

Ezofagogastroduodenoskopia byla provedena u všech pacientů s následujícími výsledky: 26,1% bylo diagnostikováno s gastroezofageálním refluxem, 65,2% – hiátová hernie, 87% – změny žaludku, 4,3% – duodenální eroze a 21,4% – aktivní dvanáctníkový vřed . Kurz vedený podáním Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (tobolky a tablety), s denní dávkou 15 × 09 v kombinaci s rabeprazolu 2 x 20 mg. nebo pantoprazol 2 x 20 mg. po dobu sedmi dní, po kterých následuje Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 během tří dnů ve stejném dávkování (15 x 109). Všichni pacienti byli 43 dní po léčbě podrobeni kontrolnímu testu na antigen stolice na Helicobacter pylori.

Výsledky:

U 22 pacientů (91,7%) byl kontrolní test na stolici negativní na přítomnost Helicobacter pylori. U dvou z pacientů (8,3%) se v kontrolní studii prokázala přítomnost Helicobacter pylori. Oba pacienti patří do skupiny předléčených pacientů, kteří neměli pozitivní účinek po užití různých antimikrobiálních látek. U dalších čtyř pacientů patřících do skupiny předléčených pacientů (z nichž jeden měl autoimunitní gastritidu) byl proveden negativní test na přítomnost Helicobacter pylori. Pacienti neuvedli vedlejší účinky při užívání Lactobacillus delbrueckii subsp. bulguricus G-LB-44 (ProViotik®). Tento předběžný test na člověku ukazuje novou a účinnou metodu léčby pacientů s Helicobacter pylori bez antibiotik.

Závěr:

Předběžné testy na lidech demonstrují novou a účinnou metodu léčby pacientů s Helicobacter pylori bez antibiotik.

Antimykotická aktivita a enzymový profil

Lactobacillus bulgaricus GLB44 Rositsa Tropcheva1, Yana Evstatieva1, Diljana Nikolova1, Světlana Saeva-Kondratenko2, Petko Petkov3, Kiril Petkov3 1Katedra biotechnologie, Biologická fakulta, Sofijská univerzita, Sofia 11 Sv.Klikov. 2Laboratories Genesis Ltd., Sofia, Bulharsko 2ProViotic Ltd., Sofia Bulharsko. E-mail: tropcheva12@mail.com

Úvod:

Plísně a kvasinky jsou hlavními kazivé mikroorganismy odpovědnými za významné ekonomické ztráty a několik zdravotních rizik v lidském potravinovém řetězci. Antimikrobiální aktivita je důležitým kritériem pro výběr biologicky chráněné bakterie mléčného kvašení (LAB). Existuje několik údajů o antifungální aktivitě bulharské bakterie mléčného kvašení, jakož i o její enzymatické aktivitě. Za tímto účelem byl zkoumán účinek komerčně dostupného probiotika ProViotik® obsahujícího kmen Lactobacillus bulgaricus GLB44 proti kvasinkám a detorálnym a toxikogénnym formám, jakož i přítomnost klíčových enzymů.

Materiály a metody:

Lactobacillus bulgaricus GLB44 (vlastněná společností Laboratories Genesis Ltd.) byl testován na protiplísňovou aktivitu proti pěti druhům plísní – Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Fusarium graminearum, Trichoderma viride a Penicillium claviforme, jakož i proti třem druhům kvasinek Kromesia spromyx – pomocí difúze agaru. Enzymový profil Lactobacillus bulgaricus GLB44 byl stanoven pomocí API ZYM – miniaturního testu (BioMerieux, Francie), podle pokynů výrobce. API pás byl „infikován“ kulturou GLB44 po dobu 24 hodin, kultivovaný v MRS bujónu a potom inkubovány při 37 ° C po dobu 4 hodin. Vyhodnocení akce je prezentovány na stupnici 5 stupnic v závislosti na sytosti barev.

Výsledky:

Profil enzymu Lactobacillus bulgaricus GLB44 Obrázek 1. Profil enzymu API ZYM Lactobacillus bulgaricus GLB44. Vyhodnocení akce je uvedeno na škále 5 stupnic v závislosti na sytosti barev.

Obrázek 2. Obrázek miniaturního testu API ZYM (BioMerieux, Francie) na Lactobacillus bulgaricus GLB44.

Lactobacillus bulgaricus GLB44 má vysokou aminopeptidózu, kyselou fosfatázu a beta-galaktosidázu, enzymatickou aktivitu a naprostý nedostatek aktivity spojené s beta-glukuronidázy v tlustém střevě.

Antifungální účinek Lactobacillus bulgaricus GLB44

Obrázek 3. antifungálních aktivita L. bulgaricus GLB44, stanovena na základě inhibice konečného růstu plísní po inkubaci při teplotě 29 ° C po dobu 5-11 dní. Výsledky jsou uvedeny jako procento inhibice. Testy in vitro odhalily širokou škálu antifungální aktivity. Lactobacillus bulgaricus GLB44 zcela inhibuje (100%) růst Aspergillus flavus, Fusarium graminearym, Trichoderma viride, Penicillium claviforme.

Pokud jde o Aspergillus niger, byla pozorována nižší inhibiční aktivita (66,6%). Obrázek 4. In vitro antimykotická aktivita Lactobacillus bulgaricus GLB44 (analýza jedné vrstvy na agaru plotně).

Obrázek 5. Inhibiční účinek na kvasinky (Control-Fungosatin, 1 000 000 U / ml) ProViotic® prokázal silnější inhibici proti Saccharomyces cerevisiae jako komerčně používané antibiotikum Fungosatin. Lactobacillus bulgaricus GLB44 neinhibuje kyselinu mléčnou Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus, což je perspektiva budoucího použití GLB44 v mlékárenském průmyslu.

Závěr:

Prokázaný silný proteolytický účinek ProViotik® dělá Lactobacillus bulgaricus GLB44 zajímavým pro použití při výrobě antihypertenzních a imunomodulačních produktů, jakož i při výrobě různých mléčných výrobků. Antifungální účinek ProViotic® je slibnou výhodou, pokud se předpokládá, že jeho potenciální použití v různých potravinářských technologiích je jako biokonzervačný prostředek v zdravých produktech proti plísňovým infekcím.

iám.